小鼠胰島β細(xì)胞Min6科研說明書

細(xì)胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
①細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時(shí)即可傳代，先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄；
②培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動(dòng)皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
③加入1mL胰酶，輕輕晃動(dòng)皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；
④3min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞不再貼壁，即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
⑤將細(xì)胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
 

產(chǎn)品介紹

生長特性 貼壁

形態(tài) 梭形

培養(yǎng)基 90% RPMI-1640+10%FBS

生長條件 95%空氣+5% 二氧化碳   37攝氏度

凍存條件 90％FBS ＋10％DMSO

污染檢測 支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測結(jié)果為陰性

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)步驟

收到常溫細(xì)胞后處理方法

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
２. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)２－４小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)．

３. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，貼壁特性(貼壁/懸?。?，細(xì)胞形態(tài)，所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基．血清比例，所需細(xì)胞因子，傳代比例，換液頻率等．

４. 靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照，記錄細(xì)胞生長狀態(tài)．

５. 貼壁細(xì)：若細(xì)胞生長密度超過８０％，可正常傳代，若未超過８０％，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留５ＭＬ左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)８０％左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松．

６. 懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至５０ＭＬ無菌離心管內(nèi)，１２００rpm離心５min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入５ml培養(yǎng)基吹打．重懸．鏡檢時(shí)，基細(xì)胞密度超過８０％，可將細(xì)胞懸液分至２個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至５ml;若細(xì)胞密度未超過８０％，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)８０％左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作．

方     式： 詳詢經(jīng)理

小鼠胰島β細(xì)胞Min6科研說明書

 內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購買提供的*培養(yǎng)基。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通交流。
培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實(shí)現(xiàn)為科學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其子代，不能用于人體實(shí)驗(yàn)和臨床診斷、治療。
2）公司細(xì)胞資源中心承諾盡zui大努力對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源相關(guān)信息進(jìn)行及時(shí)更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準(zhǔn)確性。
3）從文獻(xiàn)等處引用的信息本中心未進(jìn)行核實(shí)，僅供參考。
 

 
注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。